Extracción+de+ADN

Objetivo

En esta práctica realizaremos la extracción del ADN de las células de descamación del epitelio mucoso del interior de la boca, poniendo de manifiesto su estructura fibrilar y el extraordinario grado de arrollamiento, que permite el empaquetamiento en el núcleo celular de las larguísimas cadenas de esta molécula.

Materiales
 * - Agua mineral || - Alcohol de 96º muy frío || - Cucharillas de plástico ||
 * - Palillo o varilla de vidrio || - Sal común || - Detergente lavavajillas ||
 * - Vasos desechables || - Tubo de ensayo || - Gradilla ||

Fundamento [[image:http://genmolecular.files.wordpress.com/2010/02/munequito-adn.jpg width="240" height="237" align="right"]]
El ADN se encuentra en el interior del núcleo de todas las células, disperso y muy replegado, unido a proteínas para formar la cromatina. Por lo tanto, podremos extraerlo a partir de prácticamente cualquier material de origen biológico. Para ello es necesario romper las células para separar el núcleo y romper éste para liberar el ADN, separarlo de las proteínas y precipitarlo para separarlo de la solución acuosa.

Técnica de preparación 1.- Preparar un tubo de ensayo con alcohol etílico de 96 ºpor cada alumno y poner a enfriar lo máximo que sea posible, por ejemplo en baño de agua con hielo, mientras se realizan los pasos siguientes. 2.- Poner un poco de agua en un vaso y enjuagarse la boca enérgicamente durante al menos medio minuto para arrastrar el mayor número posible de células de descamación de la mucosa bucal (antes de hacerlo conviene haber tragado saliva para eliminar la acción de los enzimas contenidos en ella). 3.- Mientras tanto pondremos una pequeña cantidad de agua destilada (o mineral) en el mismo vaso, unos 20ml, y añadimos dos pizcas de sal común y un par de gotas de detergente lavavajillas. 4.- Expulsar el agua en el vaso de precipitados sobre la solución anterior. Dejaremos actuar durante unos 10 minutos, removiendo de vez en cuando suavemente para disolver estos componentes evitando la formación de espuma. 5.- A continuación, añadir la solución suavemente al tubo de ensayo que contiene el alcohol muy frío dejándola resbalar por la pared del tubo inclinado. El filtrado, más denso que el alcohol y algo turbio, se deposita en el fondo del tubo. Dejar reposar durante 2 ó 3 minutos sin moverlo en absoluto. El alcohol formará un sobrenadante por encima de la fase acuosa, en la que se encuentra el ADN en disolución, provocando que éste precipite. 6.- Esperar unos minutos mientras el ADN precipita en la interfase alcohol-agua formando una masa blanquecina que asciende lentamente formando un grumo de aspecto algodonoso. 7.- Tras unos minutos de reposo, el ADN tiende a subir hacia la superficie del alcohol. 8.- Entonces podremos recogerlo utilizando una varilla de vidrio, una pipeta Pasteur o simplemente un palillo. Para ello, se introduce en la masa de ADN y se extrae suavemente mientras se hace girar entre los dedos. 9.- Una vez extraído el ADN podemos suspenderlo en un recipiente adecuado para su conservación.